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收藏!样本采集指南

GCBI知识库2020-07-09 08:57:31

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咱们科研人的日常是什么?


看文献!看文献!做实验!还有…实验失败重新做实验!


也是Real令人心疼了。大家天天看文献,做实验,再看文献,做实验,有时候可能忽略了最最基础的步骤---采样。样本是后续一切的基础,样本都没取好,实验结果怎么能好呢?


超贴心的小编这里整理了取样方法给大家参考。


取样基本原则

代表性和一致性原则


实验组与对照样本在取材部位、时间处理过程等方面尽可能保持一致,从而保证实验的可信度。


迅速性原则


样本质量是影响实验结果的重要因素,因此用于研究的样本,在采集、制备、贮存、贝博app体育过程中应尽可能地做到迅速,最大限度的缩短样本从采集到实验的时间。


贝博网站多少原则


所取样本离体后,如有分离步骤应在4 ℃或冰上等贝博网站多少条件下进行,分离好的样本立即置于液氮、干冰或-80 ℃冰箱中,并保证在实验前始终处于-70 ℃以下,以免样本产生进一步代谢活动。



取样方法参考

组织样本

抽提核酸类型:DNA、RNA

组织量:100mg

具体取样步骤:

  1. 准备好冻存管,用油性记号笔在管壁标清楚样本信息;

  2. 准确切取所需部位的组织,最好切为细长薄块;

  3. 在RNase-free的0.9%生理盐水中迅速漂洗样品,以去除血渍和污物;

  4. 迅速放入冻存管,旋上盖子,迅速投入液氮冷冻15min以上;(或者迅速将组织完全浸入组织保存液中)

  5. 将冻存管装入样品袋,标记清晰;

  6.  将样品袋转移到干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

贴壁细胞样本

抽提核酸类型:DNA

细胞量:1X10^6个

参考取样步骤:

  1. 可用刮棒刮取或胰酶消化,离心收集细胞;

  2. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  3. 直接抽提DNA或转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸类型:RNA

细胞量:1X10^6个

参考取样步骤:

  1. 贴壁细胞培养或处理结束后,去除培养液;

  2. 按每10cm^2培养面积加1mL TRIZOL试剂的比例加入TRIZOL试剂;

  3. 用1mL枪头反复吹打,使TRIZOL接触所有长有细胞的培养瓶表面以进行充分消化;

  4. 转移到RNase-free的EP管中反复吹打细胞直至看不见成团的细胞块,整个溶液应该为清亮而不粘稠的状态;

  5. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  6. 转移至干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

悬浮细胞样本

抽提核酸类型:DNA

细胞量:1X10^6个

参考取样步骤:

  1. 悬浮细胞培养或处理结束后,离心(1500g,4℃离心10min)去除培养液;

  2. 将保留的细胞用PBS缓冲液快速洗一次,离心除去PBS缓冲液,收集细胞;

  3. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  4. 直接抽提DNA或转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸类型:RNA

细胞量:1X10^6个

参考取样步骤:

  1. 悬浮细胞培养或处理结束后,离心(1500g,4℃离心10min)去除培养液;

  2. 保留的细胞用PBS缓冲液快速洗一次,离心除去PBS缓冲液;

  3. 按照每10^6个细胞加1mLTRIZOL的比例加入TRIZOL试剂,反复吹打细胞直至看不见成团的细胞块,整个溶液呈清亮而不粘稠的状态;

  4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  5. 转移至干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

全血样本

抽提核酸类型:DNA

全血量:2mL

参考取样步骤:

  1. 用(非肝素钠)抗凝管采取血液样本;

  2. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  3. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸类型:RNA

全血量:2mL

参考取样方法1:

  1. 提前准备3倍体积的TRIZOL LS (Invitrogen);

  2. 用(非肝素钠)抗凝管采集血液样本;

  3. 将抗凝血加至TRIZOL LS(裂解液)中,迅速立即摇匀;

  4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  5. 裂解液室温均匀裂解10min后,转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

参考取样方法2(✨推荐):

  1. 采用PAXgene Blood RNA Tube 采集全血;

  2. 采集血液后,立即上下颠倒10次以上混匀;

  3. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  4. 室温放置至少2小时后,转移至4℃或-20℃过夜放置。足量干冰寄送。


血浆样本

抽提核酸类型:DNA

样本量:1mL

参考取样步骤:

  1. 用(非肝素钠抗凝的)真空采血管采集血液样本,2小时内进行血浆分离;

  2. 3000rpm/min,室温离心10min,收集上清至1.5mL/2mLEP管;

  3. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  4. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸类型:RNA

样本量:1mL

参考取样步骤:

  1. 用(非肝素钠抗凝的)真空采血管采集血液样本,2小时内进行血浆分离;

  2. 3000rpm/min,离心10min,收集上清,0.2mL/管分装至1.5mL/2mLEP管;

  3. 加入3倍体积的TRIZOL(裂解液),立即用力摇匀;

  4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  5. 裂解液均匀裂解10min后,转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

血清样本

抽提核酸类型:DNA

样本量:1mL

参考取样步骤:

  1. 用离心管(不抗凝)采集血液样本,37℃(或室温)静置1小时凝固分层;

  2. 3000rpm/min,离心10min,收集上清,分装至1.5mL/2mLEP管;

  3. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  4. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸类型:RNA

样本量:1mL

参考取样步骤:

  1. 用( 不需要抗凝的)真空采血管采集血液样本,尽快进行血清分离;

  2. 3000rpm/min,离心10min,收集上清,0.2mL/管分装至1.5mL/2mLEP管;

  3. 加入3倍体积的TRIZOL(裂解液),立即用力摇匀;

  4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  5. 裂解液室温均匀裂解10min后,转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

外泌体样本

抽提核酸类型:DNA

样本量:4mL血浆/血清、20mL细胞上清分离得到的外泌体

参考取样步骤1(交由我司分离外泌体):

  1. 收集待分离外泌体的血清/血浆,体液或细胞培养液;

  2. 3000rpm/min,离心10min,去除样品中的杂质等物质;

  3. 吸取上清,使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  4. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

参考取样步骤2(客户自行分离外泌体)

  1. 按照自己摸索的方法进行外泌体分离;

  2. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  3. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

抽提核酸类型:RNA

样本量:4mL血浆/血清、20mL细胞上清分离得到的外泌体

参考取样步骤1(交由我司分离外泌体):

  1. 收集待分离外泌体的血清/血浆,体液或细胞培养液3000rpm/min,离心10min,去除样品中的杂质等物质;

  2. 吸取上清,使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  3. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

参考取样步骤2(客户自行分离外泌体)

  1. 按照自己摸索的方法进行外泌体分离;

  2. 向外泌体沉淀中加入少量PBS(<500μl),混匀;

  3. 加至装有5倍TRIZOL(裂解液)的管中,立即用力摇匀;

  4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息;

  5. 裂解液室温均匀裂解10min后,转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

备注:外泌体样本如需进行NTA检测,分离后加PBS(高纯度)重悬,直接寄送即可(不需加裂解液)。

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