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取样那点事

欧易生物2020-09-10 06:05:06

进行生物分子实验最初的一步就是取样,取样的好坏直接决定了后续实验是否可以开展。

然而就是这最初的一步就成为很多生物学研究着最为糟心的经历,特别是准备娇贵的RNA抽提所需样品。

你是否也曾在取样上栽过跟头?你是否也曾反复的抽提失败而苦恼不已?如果是这样就来看看这篇小短文吧,或许你苦心准备数月甚至数年的样品就能一次抽提合格。


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取样的基本原则

1、快速原则:在样本的采集、贮藏、贝博app体育过程中在允许的范围内要做到尽可能快速,越多的准备时间越会提高样品降解的可能。


2、贝博网站多少原则:当样品脱离了活体后需要立刻投入液氮速冻,冻存彻底后放入-80℃保存,并采用干冰贝博app体育。


3、无污染原则:取样所用的器材试剂等需保证无外源性RNA酶污染。


4、生物学意义原则:采集的样品要有研究的代表性,采集时要只采集所需研究的样本,不要掺杂有与实验无关的组织在样品中,防止后续产生无效数据干扰实验结论。


5、少量多次原则:当样本量较大较多时,尽量做到分多管取样,谨防发生单管样品量过多的情况。样品个数多时,在允许的情况下做到分批处理,防止整个取样时间过长导致最早处理好的样品发生降解的情况。


6、清晰一致原则:取样时样本的编号要清晰无涂改,编号的记录和规格尽量保持一致

以上为取样的基本原则,除开一些特别处理的样本,绝大多数的样本取样过程都以满足以上基本原则为准。

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样品采用RNAlater类保存液贮存及贝博app体育的注意事项

RNAlater保存液是一种无毒的且能渗透入组织内,抑制组织中内源性RNA酶的一种液体,用RNAlater保存的样品可以在4℃情况下进行贝博app体育,同时在4℃情况下放置很长时间也不会降解。因它的这种作用,使得其成为取样时被大量生物学研究者所热衷使用的一种选择。

1、放入RNAlater的组织不能过大,因为组织较大的情况下,RNAlater很难完全渗透入组织内部,这样会导致组织内部发生降解的情况。为避免这类情况的发生,可以在放入前先将组织剪碎处理,同时需保证RNAlater完全浸没组织,这里推荐RNAlater基本装满冻存管,同时也不能完全装满因为RNAlater冻存为固态时体积会增大,容易对冻存管造成破损。


2、RNAlater不宜对细胞和植物组织进行保存,前者可能难以将细胞与RNAlater分离(RNAlater会抑制裂解液对样品的裂解效果),后者因存在细胞壁,RNAlater难以渗透入组织的细胞中。

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样品采用TRIZOL或其他抽提试剂盒裂解液保存

因为TRIZOL和抽提试剂盒裂解液本身在裂解的同时还会抑制样品内源性RNA酶的作用,使得样品不易发生降解的情况,该方法目前也是常用的一种取样后保存和贝博app体育的方案。但通过大量的实验,目前只能保证细胞沉淀放入TRIZOL保存后质量很好,组织放入其中后冻存贝博app体育得到的结果有好有坏,这里更推荐用液氮速冻干冰贝博app体育的常规方法取样,结果更为稳定。

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植物类样品取样

植物类样品采集一律是新鲜采集植物组织,液氮速冻后,用锡箔纸包裹后干冰寄送(锡箔纸上编号要清晰可辩,不要用手捏实锡箔纸,可以轻微压平。取样时保证组织的完整性,不推荐送研磨处理后的植物样品。

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细胞类样品取样处理及贝博app体育

1、采集前先对细胞量进行计数,常规抽提的细胞量推荐在10^6至10^7,一些分选细胞或者原代细胞等无法得到较多细胞量的样品推荐后续加入一些抽提微量细胞的抽提试剂盒的裂解液(这里推荐采用QIAGEN公司的74004试剂盒裂解液,不推荐采用TRIZOL裂解)。


2、对于带有液体培养基的细胞样品,如果为贴壁细胞则缓缓将培养液倒掉,加入裂解液后反复吹打。


3、如果是带培养液的细胞样本在贝博app体育时不得冻存,不然细胞会发生破裂,导致内源性RNA酶释放,抽提得到的RNA就会发生降解。

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血液样品处理

1、有的公司会有专门的抽提全血的试剂盒,可以按相关的说明书进行操作。


2、对于用抗凝管装的全血样品,不得冻存,需用碎冰贝博app体育,在2小时内(最佳处理时间),不超过24小时的时间段里进行分离处理。

以上为常规样品的取样要求和注意事项,最后祝每位科研工作者能得到自己想要的科研数据和成果。


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张晨晖  撰文

本文系欧易生物原创

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