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干血点采样技术

天津市医药科学研究所2020-05-15 10:27:37

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在进行药动学研究血药浓度测定时,往往需要采集大量的全血以获得检测所需的血浆或血清量。然而在临床前试验中,每只动物的全血量是有限的,如若多只动物血样混合又会使数据出现偏差。血浆的处理要使用固相萃取、液液萃取或者蛋白沉淀等方法,不仅耗时耗力,也降低了数据的准确性和重现性。而且,传统血样的贝博app体育和储存也多有不便,影响稳定性

干血点(dried blood spotDBS)采样法,作为一种采集生物样品的新型替代技术,克服了传统方法的诸多缺点,采血量较小,样品储存贝博app体育方便,特别适合小动物的连续样品采集。目前DBS 法已广泛应用在诸多领域中,为临床前药动学研究提供可靠、便捷的技术支持



干血点采杨技术

干血点采样,即将全血样品收集在卡纸上,作为一种采集生物样品的新型替代技术,在血样采集方法上比传统方法有一定的优势。它需求较少的血量(通常小于 100 μL),可减少动物使用。方便血样采集,样本直接涂敷于纸板,无需使用另外采集容器。方便室温储存和贝博app体育,简化样品前处理。特别适合小动物的连续样品采集




样品采集方法

小动物(如小鼠、大鼠)可以从尾部采血。将血样直接滴到采样卡的圆圈内,也可以使用加样枪将血样点到采样卡上,这样可避免潜在的血细胞比容差异、采血量的影响、血样在采样卡上分布不均匀等采样错误。加样枪头应距离采样卡若干毫米,当血样碰触到卡时会迅速分散开,使血样在卡上分布均匀



样品干燥、储存和贝博app体育方法 

在储存和贝博app体育前,DBS 样品必须经过干燥。一般,在室温开放环境(1522 ℃)下,干燥时间至少为 23h。干燥时间取决于采样卡的类型以及采血量的多少。注意样品不能加热、重叠放置或者接触其他表面,需要的话应避免阳光直射。在干燥之后,为避免 DBS 样品接触水分或湿气而改变提取率或发生降解,可用纸覆盖 DBS 样品并装进含有干燥剂的封口袋里。另外,包装袋内应含有湿度指示剂。通过这种方式包装的 DBS 样品可在室温下储存数周至数年。如果样品含有不稳定的化合物,则应储存在贝博网站多少环境。按照上述方法包装的 DBS 样品可通过邮寄方式贝博app体育,在此期间不需考虑血样暴露或者传染性物质等问题


样品的提取

在定量分析时,从 DBS 卡上打下一个或多个一定直径的圆片放入分析试管或 96 孔板中进行提取。利用合适的提取溶剂破坏基质或滤纸里分析物与蛋白的结合,并通过振荡或者涡旋等方式将分析物洗脱下来,涡旋时间一般为2060 s,必要时也可采用超声处理来提高提取效率。离心之后,将提取物转移到进样瓶中直接进样,或者吹干后用流动相复溶进样



相较于传统的血样采集方法,DBS 采集全血样品具备了一定优势。DBS 的采血量少,特别适合小动物的血样采集;使用DBS采集全血的预处理简单,无需冷冻离心分离血浆;DBS 样品储存方便,可通过普通的邮政系统贝博app体育,无需冰箱或者干冰。但是作为一种新方法,DBS 法尚存不足,如,测定结果的准确性可能受点样条件影响;不适用于不稳定的药物。虽然 DBS 技术还有待完善,但其较一般样品采集及处理方法显示出的优点使其在药动学研究的应用范围越来越广泛



图文供稿:孔

图文编辑:胡志洁

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