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关于高通量测序RNA样品制备,你要知道的那些事

GENEWIZ金唯智2020-08-23 15:43:28

高通量测序样品准备工作非常重要,若样品遭到破坏,就很难得到完美的测序结果。上次我们给大家汇总了DNA样品制备的内容,今天来看看RNA样品制备需要注意哪些事项呢?

DNA样品制备指南

点击上方蓝字即可查看

1.样品选取


与DNA样品制备不同的是,由于不同发育阶段下不同组织部位中的转录本及基因表达存在差别,因此在选取样品时要根据实验目的选取材料。

植物组织

根据实验目的选取需要研究的组织部位,优先选取幼嫩组织。取样后用无菌水冲洗,并用吸水纸吸干样品表面液体,迅速投入液氮中,-80°C保存,使用干冰贝博app体育。由于RNA较DNA易降解,因此操作要尽快。组织块不宜太大,易冻存,便于研磨及提取。

动物组织

组织离体后在冰上分割成1~5mm的小块组织,操作要迅速,并尽可能在冰上进行。动物组织样品可选择液氮冻存或RNAlater保存,置于-80°C保存,使用干冰贝博app体育。使用RNAlater保存时务必保证组织被充分浸润。易降解的组织、临床肿瘤样本或在野外采样不易携带液氮时,优先选择RNAlater保存。

血液样品

分离好的血细胞建议使用20倍体积TRIzol LS充分裂解后-80°C保存,使用干冰贝博app体育;全血样品建议使用3倍体积TRIzol充分裂解后寄送。血液样品中RNA极易降解,反复冻融会造成红细胞破裂加速降解,因此样品制备时不建议直接冻存。

细菌/真菌样品

取5mL以上对数生长期菌液离心,收集菌体后在3min内液氮速冻,干冰贝博app体育。菌类样品不建议保存于TRIzol裂解液或RNAlater中。

2.提取方法


3.样品取样量说明

注:利用PacBio测序技术进行的全长转录组,其核酸需求量为普通转录组的2~3倍,因此组织样品量需适当增加。

4.核酸样品量


5.样品包装及注意事项

样品包装及送样注意事项可以参考DNA样品制备。

1.不要用纱布(样本易粘附在纱布上)、纸张(贝博网站多少冻存易碎)直接包裹样本,而是用铝箔或进口冻存管包装。

2. 在包裹样本的铝箔或进口冻存管表面,用油性记号笔标明样本编号等信息,并且不要与乙醇等有机溶剂接触。

3.不要用玻璃容器或密封性不好的容器在液氮中保存样本(玻璃器皿或密封性不好的容器从液氮中取出后会发生爆炸);样本包装中不要使用透明胶带(胶带在贝博网站多少条件下粘性减弱,易掉落)。

4.不要把标签纸或其他纸制的说明性文件放入样本袋内,因为纸张在液氮中易碎。

5.不要在一只样本袋中放过多的样本,以防无法放入液氮罐或无法从液氮罐中取出。

6.客户在填写《样本信息单》时应当详细描述样本的类型、处理方法、储存条件、储存时间以及需要进行的检测类型等相关细节,以便技术人员确定合理的样本抽提或处理方案。

7.干冰使用量:24小时到达的,干冰数量不得低于5公斤;大于24小时到达的,建议保证每天3公斤的干冰数量。夏季可以适当再多增加部分干冰(平时的 1.5 倍)。

如果您还有其他疑问,可以发送邮件至NGS.Service@genewiz.com.cn,或拨打电话400-8100-669 选项3,我们会有专业的技术人员为您提供咨询服务


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