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【技术】瘦肉精胶体金快速检测法

四川畜牧兽医2020-05-16 10:37:50

   

  瘦肉精是指在饲料和畜牧生产中,国家禁止使用的β-肾上腺素受体激动剂类化合物,包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等十几种物质。 瘦肉精属于非蛋白质激素,使用后会在猪体中形成残留,尤其是在猪的肝脏等内脏器官形成高残留,进而危害人体健康。

    瘦肉精主要导致人出现肌肉震颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状,对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大患者的危害更大,严重时可致人死亡。


1  瘦肉精检测样本

1.1  采集人员  

   样品由不少于2人的检测单位人员采集。采集样品后,采集人员应填写采样单。

1.2  采集比例  

  饲喂不同品牌、批次饲料的猪(牛、羊)2~3头;贝博app体育的猪(牛、羊)每批次(同一车、船贝博app体育的)50头以上的不少于3%的抽样,50头以下的抽样1~2头;屠宰场同一批猪(牛、羊)50头以下的,至少抽检1头,50头以上的,不少于3%的抽样。猪(牛、羊)来自多个养殖场(户)的,抽样样品应涵盖每个场(户),每个场(户)抽检数量不少于1头。

1.3  样品液制备

1.3.1  尿样   

  用干燥、洁净的离心管或适当容器采集50 mL左右被检畜尿液作样品。如不立即进行检测,尿样在2~8 ℃条件下可保存24 h,保存样品时要避免受污染。

1.3.2  组织样本  

  组织样本(包括被检畜的瘦肉、肝脏、肺脏和肾脏)应立即检测或收集在塑料袋中及时送检。若不能及时检测,样本在2~8 ℃条件下可保存24 h,-20 ℃冷冻条件下可保存一周,冷冻时忌反复冻融。

    检测前,组织样本应剪碎,并称取1 g装入离心管中,加1 mL提取液后盖紧管盖,放入沸水中加热10~15 min,然后取出离心管静置至室温,再移出上清液作样品液备用。

1.3.3  饲料样本   

  研碎饲料,称取1 g放入5 mL离心管,然后加入2 mL去离子水充分混匀,5 min后,用滤纸过滤液体(如上清液仍然浑浊,则用5 000~10 000 r/min离心5 min),再移出上清液作样品液备用。

1.4  样品分装保存  

  现场检测为阴性的,样品不需留样。需要进行确证的检测样品或风险检测样品,应分装、封存后送检和保存,分装样品分作三份,按检测用样、检测单位留样、被抽检单位留样进行标记,并粘贴加盖检测单位印鉴的封条,所有样品的编号应当与被检畜的耳标号对应。样品贝博app体育、保存应在贝博网站多少条件下进行,长期保存的应在-20 ℃以下冻存。


2  检测项目

    检测被检畜尿样、组织和饲料中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇残留。


3  检测卡质量要求

    瘦肉精胶体金检测卡的灵敏度、稳定性、交叉反应等参数应符合相关要求;假阳性率应不高于5%,假阴性率为零;盐酸克伦特罗和莱克多巴胺检测限应不高于3 μg/L,沙丁胺醇检测限应不高于5 μg/L。


4  检测原理

    瘦肉精胶体金检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理,检测时样本中的瘦肉精在流动的过程中与胶体金(或胶体硒)标记的特异性单克隆抗体结合,抑制了抗体和NC膜检测线上瘦肉精-蛋白偶联物的结合。如果样本渗出液中瘦肉精含量大于3 ng/mL,检测线不显色,则结果为阳性,若检测线显红色,则结果为阴性。


5  操作步骤

5.1  待检样品液恢复至室温。

5.2  将检测卡平放,用滴管吸取待检样品液2~3滴垂直加于加样孔后,开始计时。

5.3  3~5 min后根据示意图判定检测结果,30 min之后结果判定无效。


6  结果判定 

6.1  阴性(-)  

  两条紫红色带出现表示样品中盐酸克伦特罗低于3 ng/mL、莱克多巴胺低于3 ng/mL、沙丁胺醇低于5 ng/mL,或不含有。

6.2  阳性(+)  

  检测T线无显色表示样品中盐酸克伦特罗高于3 ng/mL、莱克多巴胺高于3 ng/mL、沙丁胺醇高于5 ng/mL。

6.3  无效  

  未出现质控线C线,表明操作不正确或检测卡已失效。


7  检测注意事项

    检测卡应在打开1 h内使用;检测时避免阳光直射和空调直吹;如果尿样和组织提取样本出现沉淀或浑浊物,应离心后再检测;不洁尿样(如含有漂白剂、明矾等)可能导致产生错误结果,其应离心后再检测。

    自来水、蒸馏水或去离子水不能作阴性对照;金标卡储存于阴凉的干燥处,切勿冷冻,其有效期为18个月。


8  处理

8.1  检测阴性  

  检测结果为阴性的,所检测的猪(牛、羊)、猪(牛、羊)产品、饲料中不含瘦肉精,可按要求饲养、贝博app体育、屠宰或销售。

8.2  检测阳性  

  检测结果为阳性或疑似阳性的,应立即进行二次快速检测,如二次快速检测结果为阳性,应立即禁止同批猪(牛、羊)、同批猪(牛、羊)产品、饲料移动或对其进行封存,同时应向当地畜牧兽医主管部门报告,并及时采样进行确证检测。

    如二次快速检测结果为阴性的,需进行第三次快速检测,若检测结果为阴性,应按阴性结果处理,检测结果为阳性的,按阳性结果处理。

8.3  确证阴性 

   确证检测结果为阴性的,检测机构应出具确证检测报告,并及时告知送样单位。

8.4  确证阳性  

  确证检测结果为阳性的,送样单位在收到确证检测结果24 h内,应书面向当地畜牧兽医主管部门报告,同时告知被抽样单位。当地畜牧兽医主管部门应根据报告及时查处违法单位,并通报公安机关。

9  快速检测方法比较

    瘦肉精胶体金检测卡用于定性被检畜尿液(如猪尿、牛尿、羊尿等)中的盐酸克伦特罗残留,整个检测只需要5~10 min左右,其灵敏度为3 ng/mL。采用该检测卡进行检测快速方便,适用于屠宰场、农贸市场、超市等现场快速检测。

    采用瘦肉精ELISA试剂盒可检测被检畜尿、肌肉、肝脏及饲料中的盐酸克伦特罗。该试剂盒可同时用于处理96个样品,操作时间少于45 min,灵敏度为0.025~0.1 ng/mL,其相对于胶体金检测卡检测结果更准确,适用于实验室快速检测。■(本文作者单位:四川省营山县渌井镇畜牧兽医管理站)

原文刊载于《四川畜牧兽医》2017第9期P37